INNOVATION CENTER FOR GENE MEDICINE

충남대학교 신약전문대학원 & 대전테크노파크 바이오센터

AAV 벡터 생산

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AAV (adeno-associated virus) vector
  1. 재조합 adeno-associated virus (AAV) 벡터는 생체(in vivo)에 유전자를 전달하는데 최적화된 바이러스 벡터 입니다.
  2. AAV 벡터는 다양한 동물 조직으로 효과적인 유전자전달이 가능할 뿐만 아니라, 비병원성과 낮은 면역원성으로 인해 유전자 치료에서 가장 효과적인 운반체로 알려져 있습니다.
  3. 당사는 AAV기반 유전자 전달 및 치료 연구를 지원하기 위해 우수한 품질의 AAV 패키징 서비스를 제공합니다.
    특히, 오랜 경험과 기술력으로 다양한 연구에 적합한 titer, purity, viability 및 consistency가 확보된 벡터를 제공합니다.
Serotype Tissue tropism
AAV1 Smooth muscle, CNS, lung, retina, inner ear, pancreas, heart, liver
AAV2 Smooth muscle, CNS, liver, kidney, retina, inner ear
AAV3 Smooth muscle, liver, lung
AAV4 CNS, retina, lung, kidney
AAV5 Smooth muscle, CNS, lung, retina
AAV6 Smooth muscle, heart, lung, adipose, liver
AAV6.2 Lung, liver, inner ear
AAV7 Smooth muscle, retina, CNS, liver
AAV8 Smooth muscle, CNS, retina, inner ear, liver, pancreas, heart, kidney, adipose
AAV9 Smooth muscle, lung, liver, heart, pancreas, CNS, retina, inner ear, testis, kidney
AAVrh10 Smooth muscle, lung, liver, heart, pancreas, CNS, retina, kidney
AAV-DJ Liver, heart, kidney, spleen
AAV-DJ/8 Liver, brain, spleen
AAV-PHP.eB CNS
AAV-PHP.S PNS
AAV2-retro Spinal nerves
AAV2-QuadYF Endothelial cell
AAV2.7m8 Retina, inner ear
서비스 규격
규모 적용 역가 및 용량 비고
Research Scale
in ICGM		 동물모델 in vivo > 5 x 1011 vg/mL* in PBS
10 μL/tube x 10 vials		 견적 의뢰서 다운로드
Large scale 비임상용 시험용
또는 GMP grade
(공정개발 포함.)		 문의 바람 자문∙면담 의뢰서 다운로드     icgm@icgm.kr

* 단위 vg/mL (viral genome/mL)

  1. 일반적으로 AAV벡터로 패키징 되는 유전자 사이즈가 ssAAV의 경우 4 kb (scAAV의 경우 2 kb)보다 작은 경우에 상기 타이터로 생산이 가능합니다. 이보다 큰 크기의 경우 바이러스에 패키징 된 유전자의 integrity를 보장할 수 없으며, 위에 명시된 타이터를 보장할 수 없습니다.
  2. 아래 유전자를 포함한 AAV 벡터를 생산하는 경우 타이터를 보장할 수 없습니다.
    • 바이러스 패키징 과정 및 세포 혹은 바이러스의 integrity를 손상시키는 유전자 (예:세포융합 매개 단백질 등)
    • 독성 유전자
    • 반복서열이나 stem-loop 서열 (예:반복적 또는 높은 GC-리치 시퀀스)와 같은 바이러스 패키징 과정에 부정적인 영향을 미칠 수 있는 서열)
    • 패키징 효율성에 불확실성을 초래할 수 있는 공개되지 않은 시퀀스 또는 일반적이지 않은 ITR을 포함하는 고객 제공 transfer vector plasmid
    • 고객이 제공한 rep-cap plasmid
    • 고객이 제공한 Helper plasmid
  3. Serotypes 2, 3, 4, 6, PHPeB의 타이터는 다른 serotype의 타이터보다 30-90% 가량 낮게 생산됩니다.

**예상 소요 시간은 vector plasmids 확보한 날로부터 생산 완료까지의 시간입니다.

AAV 벡터 생산, 농축 및 정제
  1. ICGM 재조합 AAV 생산은 293T 혹은 LV293 세포주에 아래 플라스미드를 transient transfection하여 진행됩니다.
    • AAV transfer plasmid
    • AAV rep-cap plasmid
    • Adeno-helper plasmid
  2. Research scale의 AAV vector 생산은 affinity resin 정제 후, PBS에 resuspending되어 발송됩니다.
  3. Large-scale 공정개발 및 GMP grade 생산은 기술상담을 통해 진행됩니다.
  4. ICGM은 addgene에서 제공하는 ITR-targeting qPCR primer를 이용하여 재조합 AAV 벡터의 역가를 산출합니다.
고객이 제공하는 벡터

고객이 제공한 AAV 플라스미드를 사용하는 생산의 경우, 아래 재료제공 지침에 따라 당사로 보내 주십시오. 고객이 제공한 모든 재료는 ICGM에 입고 후, 필수적인 QC가 진행됩니다. 고객이 공급한 재료가 QC를 통과할 때까지 생산이 시작되지 않을 수 있다는 점에 유의하시기 바랍니다.

AAV 벡터 생산 요청 시, ICGM에 제공되어야 할 정보 및 재료
  1. AAV 벡터 생산(패키징 서비스) 의뢰서
  2. Transfer plasmid DNA (ITR flanked transfer vector plasmid)와 그의 서열 정보
    • 플라스미드 최소 200 ng/μL x 30 μL (≥ 1.8~2.0 A260/280)
    • 보내주신 플라스미드는 ICGM 내부에서 재증폭 되어 검증 후 생산에 사용됩니다.
    • 보내주신 플라스미드는 생산 의뢰한 연구자에게 재발송 되지 않습니다.
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